Seebio?TEV 蛋白酶（TEV Protease）活性測(cè)定試劑盒(熒光法)

EKM0101B

TEV蛋白酶（煙草蝕刻病毒蛋白酶）是一種半胱氨酸蛋白酶，識(shí)別序列為Glu-X-X-Y-X-Gln-Gly/Ser，裂解位于Gln和Gly/Ser之間。本試劑盒基于TEV蛋白酶的特異性底物肽被切割后形成穩(wěn)定、高熒光、低背景的熒光產(chǎn)物，通過(guò)檢測(cè)386nm激發(fā)光下，480nm發(fā)射光的熒光強(qiáng)度，再利用標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確定量出TEV蛋白酶的活性。本品可用于檢測(cè)樣本中TEV蛋白酶活性或TEV酶殘留量。

1.本試劑盒簡(jiǎn)單、快速，適合純品及組織裂解液上清中TEV酶活性的定量檢測(cè)；

2.TEV 酶活性的線性檢測(cè)范圍為0.1~ 1.0 U/μl；

3.本品具有穩(wěn)定、高熒光、低背景特征。

請(qǐng)事先準(zhǔn)備好無(wú)菌離心管、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、微量移液器、熒光酶標(biāo)儀等。

1. 標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備：取一支TEV酶標(biāo)準(zhǔn)品，2000~3000rpm離心30s，將液體集中于管底，首孔不加稀釋液，直接取加10μl標(biāo)準(zhǔn)品；后續(xù)取4支稀釋管，每管加入25μl的稀釋液后，再取25μl的標(biāo)準(zhǔn)品（1U/μl）加入首支稀釋管中、用移液器反復(fù)吹吸混合5次后，取25μl加入下一管，依次做4次倍比稀釋；最后制成1.0、0.5、0.25、0.125和 0.0625 U/μl的5個(gè)不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2. 樣品準(zhǔn)備：將待測(cè)樣品中TEV酶的活性濃度調(diào)整到0.1 ~ 1.0 U/μl。

3. 底物溶液準(zhǔn)備：取一支底物液，輕微離心收液至管底，加入300μl稀釋液，混勻，離心備用。

4. 取黑色96孔反應(yīng)板，各孔做好標(biāo)記，并按下表配制反應(yīng)液（每個(gè)檢測(cè)樣品設(shè)2個(gè)復(fù)孔）：

5. 檢測(cè)流程：

（1）將微孔板置于30℃恒溫孵育30min；

（2）孵育完成后，加入終止液，50μl /孔，混勻；

（3）加入100μl 溶液A，混勻；再加50μl 溶液B，混勻，靜置2min后進(jìn)行熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)；

（4）熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)參數(shù)為：激發(fā)波長(zhǎng)386nm，發(fā)射波長(zhǎng)480nm。

6. 數(shù)據(jù)分析：

計(jì)算各孔凈熒光值（檢測(cè)值減去空白對(duì)照）和各組平均凈熒光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算獲得樣品活性值。

1.本試劑盒僅供研究使用。

2.打開啟用后，放至2-8℃，建議1-2周內(nèi)使用完。

3.低溫可致溶液A有結(jié)晶析出，用前請(qǐng)溫浴溶解。

4.溶液B每次加取后要迅速旋蓋密封，防止污染。

2-8℃儲(chǔ)存，有效期12個(gè)月。

1.獲得測(cè)定值，計(jì)算平均凈熒光值

2.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合標(biāo)準(zhǔn)方程式

< 

3.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方程，計(jì)算樣品活性濃度

您若有疑問(wèn)或反饋，請(qǐng)聯(lián)系：

Tel:021-50272981*6217或Email: market@seebio.cn