【產(chǎn)品描述】

PEI是一種高電荷陽離子聚合物，易結(jié)合負(fù)電荷的核酸分子形成復(fù)合物，由此介導(dǎo)核酸進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。PEI用于核酸轉(zhuǎn)染具有高效、成本低、穩(wěn)定等特點(diǎn)，適用于HEK293、CHO等多種細(xì)胞系的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。本產(chǎn)品分子量為40,000Da，可用于懸浮或貼壁細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。

【使用方法】

細(xì)胞轉(zhuǎn)染

1.轉(zhuǎn)染前一天鋪板細(xì)胞，以轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70%-80%為宜，并更換成新鮮的完全培養(yǎng)液。

2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：將-20℃保存的PEI取出，融解后室溫孵育30min；用不含血清的培養(yǎng)基稀釋DNA至濃度為20ng/ul，取適量PEI溶液加入DNA溶液中（建議DNA和PEI的質(zhì)量比控制在1:1~1:3），室溫孵育15-30min，形成DNA-PEI復(fù)合物。

3.輕輕混勻并直接將DNA-PEI復(fù)合物加入細(xì)胞中，水平混勻，繼續(xù)培養(yǎng)4h-6h后更換含血清的培養(yǎng)基。

4.瞬時(shí)轉(zhuǎn)染時(shí)，通常在轉(zhuǎn)染后24-48小時(shí)檢測(cè)產(chǎn)物表達(dá)；穩(wěn)定轉(zhuǎn)染時(shí)，12-24小時(shí)后傳代并進(jìn)一步通過篩選培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得穩(wěn)定整合的細(xì)胞克隆。

【參考用量】

針對(duì)不同培養(yǎng)皿，您可以參考下表制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物，但較佳轉(zhuǎn)染條件往往需要更多比例的測(cè)試。

【應(yīng)用舉例】

利用Seebio? 線性聚乙烯亞胺轉(zhuǎn)染CHO-K1