Seebio? 辣根過氧化物酶(HRP)
- 別名:Horseradish Peroxidase;9003-99-0
- 編碼:ECE0066U
- 級(jí)別:
- 簡(jiǎn)介:辣根過氧化物酶(HRP)分離自辣根中, 它可用于生物化學(xué)應(yīng)用,如蛋白質(zhì)印跡、ELISA和免疫組織化學(xué)。 辣根過氧化物酶可用于擴(kuò)增弱信號(hào)并增加靶分子(例如蛋白質(zhì))的可檢測(cè)性。
基礎(chǔ)信息
中文名 | Seebio? 辣根過氧化物酶(HRP) |
英文名 | Horseradish Peroxidase |
Mol.Weight | 44kDa |
產(chǎn)品介紹
【產(chǎn)品基本信息和用途】
辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)是一種糖蛋白,從辣根(Horseradish)中提取。HRP分子量為44,000,等電點(diǎn)為pI 3~9,是一個(gè)球狀分子,被血紅素鐵分成遠(yuǎn)端區(qū)和近端區(qū)。血紅素鐵與HRP共價(jià)連接。HRP的純度通常可通過A403與A280的比值(RZ值)來檢測(cè)。然而,不同的同工酶在相同純度下會(huì)有不同的RZ值。適合HRP酶催化的pH值因供氫體不同而稍有差異,但多在pH 5左右。已知疊氮化鈉,氰化物,L-胱氨酸,重鉻酸鹽,亞乙基硫脲,羥基胺,硫化物,釩酸,對(duì)氨基苯甲酸等能夠抑制HRP活性,Cd2+,Co2+,Cu2+,F(xiàn)e3+,Mn2+,Ni2+和Pb2+離子具有酶活抑制作用。HRP在組織化學(xué)染色和診斷分析中被廣泛用作報(bào)告酶。在有機(jī)合成中,HRP被用于聚合反應(yīng)、氧化脫氫反應(yīng)和磺化氧化反應(yīng)。HRP還被用作電化學(xué)生物傳感器,在生物修復(fù)系統(tǒng)中用于降解合成染料等。
【應(yīng)用舉例】
高碘酸鹽法抗體交聯(lián)
1、將HRP溶解于含有8mM高碘酸鈉的0.1M碳酸鈉中,濃度為1mg/mL;
2、室溫放置2小時(shí),使HRP被充分氧化;
3、按HRP:IgG=1:7(mg/mg)的比例加入過量的IgG,然后加入HRP和IgG總質(zhì)量1/6的干燥Sephadex,以破壞未反應(yīng)的高碘酸鹽;
4、室溫孵育3小時(shí);
5、過濾去除Sephadex,保留溶液;
6、加入l/20 體積的新鮮硼氫化鈉溶液(5 mg/ml,溶解在0.1 mM氫氧化鈉中),半小時(shí)后重復(fù)加入3/20 體積的新鮮硼氫化鈉溶液,保持1小時(shí)。
7、用50%硫酸銨沉淀HRP-IgG偶聯(lián)物,未交聯(lián)的自由IgG用Con A親和層析(PBS-NaC1平衡)去除,結(jié)合在柱上的HRP-IgG用0.01 M α-甲基D-吡喃甘露糖苷洗脫。
參考文獻(xiàn):1. Anal Biochem. 1984 Feb;136(2):451-7;
參考文獻(xiàn):2. Arch Virol. 1982;74(4):277-91.
【酶活定義】
在25 ℃,pH7.0時(shí),每分鐘催化轉(zhuǎn)化一個(gè)微摩爾過氧化氫的酶量。
【產(chǎn)品組分】
凍干粉,無添加成分。
【質(zhì)量指標(biāo)】
項(xiàng)目 | 指標(biāo) |
來源 | 辣根 |
分子量 | 44kDa |
活性 | ≥250U/mg |
RZ值 | 2.5-4.0 |
外觀 | 褐色結(jié)晶性凍干粉狀 |
【運(yùn)輸、儲(chǔ)存條件和有效期】
低溫運(yùn)輸,2-8℃保存,有效期≥1年。
【注意事項(xiàng)】
1、本產(chǎn)品限科學(xué)研究使用。
2、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
【產(chǎn)品基本信息和用途】
辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)是一種糖蛋白,從辣根(Horseradish)中提取。HRP分子量為44,000,等電點(diǎn)為pI 3~9,是一個(gè)球狀分子,被血紅素鐵分成遠(yuǎn)端區(qū)和近端區(qū)。血紅素鐵與HRP共價(jià)連接。HRP的純度通常可通過A403與A280的比值(RZ值)來檢測(cè)。然而,不同的同工酶在相同純度下會(huì)有不同的RZ值。適合HRP酶催化的pH值因供氫體不同而稍有差異,但多在pH 5左右。已知疊氮化鈉,氰化物,L-胱氨酸,重鉻酸鹽,亞乙基硫脲,羥基胺,硫化物,釩酸,對(duì)氨基苯甲酸等能夠抑制HRP活性,Cd2+,Co2+,Cu2+,F(xiàn)e3+,Mn2+,Ni2+和Pb2+離子具有酶活抑制作用。HRP在組織化學(xué)染色和診斷分析中被廣泛用作報(bào)告酶。在有機(jī)合成中,HRP被用于聚合反應(yīng)、氧化脫氫反應(yīng)和磺化氧化反應(yīng)。HRP還被用作電化學(xué)生物傳感器,在生物修復(fù)系統(tǒng)中用于降解合成染料等。
【應(yīng)用舉例】
高碘酸鹽法抗體交聯(lián)
1、將HRP溶解于含有8mM高碘酸鈉的0.1M碳酸鈉中,濃度為1mg/mL;
2、室溫放置2小時(shí),使HRP被充分氧化;
3、按HRP:IgG=1:7(mg/mg)的比例加入過量的IgG,然后加入HRP和IgG總質(zhì)量1/6的干燥Sephadex,以破壞未反應(yīng)的高碘酸鹽;
4、室溫孵育3小時(shí);
5、過濾去除Sephadex,保留溶液;
6、加入l/20 體積的新鮮硼氫化鈉溶液(5 mg/ml,溶解在0.1 mM氫氧化鈉中),半小時(shí)后重復(fù)加入3/20 體積的新鮮硼氫化鈉溶液,保持1小時(shí)。
7、用50%硫酸銨沉淀HRP-IgG偶聯(lián)物,未交聯(lián)的自由IgG用Con A親和層析(PBS-NaC1平衡)去除,結(jié)合在柱上的HRP-IgG用0.01 M &α-甲基D-吡喃甘露糖苷洗脫。
參考文獻(xiàn):1. Anal Biochem. 1984 Feb;136(2):451-7;
參考文獻(xiàn):2. Arch Virol. 1982;74(4):277-91.
【酶活定義】
在25 ℃,pH7.0時(shí),每分鐘催化轉(zhuǎn)化一個(gè)微摩爾過氧化氫的酶量。
【產(chǎn)品組分】
凍干粉,無添加成分。
【質(zhì)量指標(biāo)】
項(xiàng)目 | 指標(biāo) |
來源 | 辣根 |
分子量 | 44kDa |
活性 | ≥250U/mg |
RZ值 | 2.5-4.0 |
外觀 | 褐色結(jié)晶性凍干粉狀 |
【運(yùn)輸、儲(chǔ)存條件和有效期】
低溫運(yùn)輸,2-8℃保存,有效期≥1年。
【注意事項(xiàng)】
1、本產(chǎn)品限科學(xué)研究使用。
2、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
質(zhì)量指標(biāo)
Purity(SDS-PAGE) | ≥90% |
Activity(Guaiacol method) | ≥250U/mg |
RZ (The RZ is defined as the ratio of the absorbance at 403 nm to the absorbance at 275 nm. This value is an expression of the ratio of hemin to protein content. ) | 2.5 - 4.0 |
Appearance | Freeze-dried powder |
MSDS
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