藻紅蛋白（R-Phycoerythrin, R-PE）是從紅藻中分離純化的一種熒光蛋白，是一種新熒光標記染料。因為其有強熒光，很好的吸光性能和很高的量子產率，在可見光譜區有很寬的激發及發射范圍。

產品性質

分子量: 約 240,000 道爾頓

純度: Amax/A280 > 5.5

吸收峰max: 480/565±5 nm

熒光發射峰: 575±5 nm

結構: 分子結構為通過硫醚鍵連接的載體蛋白與開鏈線性延展的四咯化合物。

藻紅蛋白(R-PE)結構式

產品優勢

1、在較寬的PH范圍內具有較寬的吸收光譜，比較容易選擇合適的激發波長，從而得到熒光發射，且激發時有特異的熒光發射峰；

2、吸光度和熒光量子產率很高，熒光強而穩定，靈敏度高；

3、具有較小的熒光背景，不易淬滅，熒光保存期較長；

4、水溶性好，易與其他分子交聯結合，非特異性吸附少；

應用領域

1、作為熒光探針標記抗體，生物素和鏈霉親和素或其他蛋白，用于免疫熒光、免疫組化、流式細胞術及活體成像實驗。

2、有研究表明藻紅蛋白是一種新的無其它副作用的光敏物質。

3、藻紅蛋白作為一種自然色素并且無其它副作用。

藻紅蛋白（R-PE)標記抗體的步驟

1、藻紅蛋白的預處理

藻紅蛋白凍干粉用純化水溶解，濃度調整到 5-10 毫克/毫升為宜。

2、藻紅蛋白的衍生化

將琥珀酰亞胺-4-(N-甲基馬來酰亞胺)環已烷-1-碳酸酯)(SMCC)溶解于無水二甲基亞砜（DMSO）配制成 10毫克/毫升的母液，每毫克的藻紅蛋白添加11微升的琥珀酰亞胺-4-(N-甲基馬來酰亞胺)環已烷-1- 碳酸酯)(SMCC)，鋁箔封好后于室溫旋轉反應60分鐘，使藻紅蛋白分子上的氨基與琥珀酰胺反應生成衍生化的藻紅蛋白。

交換緩沖液預先平衡凝膠層析柱，將衍生化的藻紅蛋白過柱，收集藻紅蛋白峰。

3、抗體的處理

二硫蘇糖醇（DTT）溶解于蒸餾水中，配制成1摩爾/升的二硫蘇糖醇（DTT）母液，調整抗體的濃度，使其濃度至少為4毫克/毫升。

每毫升抗體溶液中加入20微升的二硫蘇糖醇（DTT）母液，室溫靜置反應40分鐘，將抗體的二硫鍵打開形成巰基。

交換緩沖液預先平衡凝膠柱，將反應液過柱，收集抗體部分。

4、藻紅蛋白和抗體的共價交聯

每毫克抗體加入3.2毫克的琥珀酰亞胺-4-(N-甲基馬來酰亞胺)環已烷-1-碳酸酯)(SMCC)衍生化的藻紅 蛋白，鋁箔封好后于室溫旋轉反應60分鐘，使藻紅蛋白分子上的馬來酰亞胺基和抗體上的巰基實現共價交聯。

10毫克的N-乙基馬來酰胺（NEM）溶解于1.0毫升的無水二甲基亞砜（DMSO）中制成N-乙基馬來酰胺（NEM）母液（現配現用）。

每毫克抗體中加入3.4微升N-乙基馬來酰胺（NEM）母液，鋁箔封好后于室溫旋轉反應60分鐘，反應后，使抗體上的巰基封閉。

5、交聯物的存儲

將交聯物于存儲緩沖液中透析后保存于2-8℃。