藻紅蛋白（R-Phycoerythrin, R-PE）是從紅藻中分離純化的一種熒光蛋白，是一種新熒光標記染料。因為其有強熒光，很好的吸光性能和很高的量子產(chǎn)率，在可見光譜區(qū)有很寬的激發(fā)及發(fā)射范圍。

產(chǎn)品性質(zhì)

分子量: 約 240,000 道爾頓

純度: Amax/A280 > 5.5

吸收峰max: 480/565±5 nm

熒光發(fā)射峰: 575±5 nm

結(jié)構(gòu): 分子結(jié)構(gòu)為通過硫醚鍵連接的載體蛋白與開鏈線性延展的四咯化合物。

藻紅蛋白(R-PE)結(jié)構(gòu)式

產(chǎn)品優(yōu)勢

1、在較寬的PH范圍內(nèi)具有較寬的吸收光譜，比較容易選擇合適的激發(fā)波長，從而得到熒光發(fā)射，且激發(fā)時有特異的熒光發(fā)射峰；

2、吸光度和熒光量子產(chǎn)率很高，熒光強而穩(wěn)定，靈敏度高；

3、具有較小的熒光背景，不易淬滅，熒光保存期較長；

4、水溶性好，易與其他分子交聯(lián)結(jié)合，非特異性吸附少；

應(yīng)用領(lǐng)域

1、作為熒光探針標記抗體，生物素和鏈霉親和素或其他蛋白，用于免疫熒光、免疫組化、流式細胞術(shù)及活體成像實驗。

2、有研究表明藻紅蛋白是一種新的無其它副作用的光敏物質(zhì)。

3、藻紅蛋白作為一種天然色素并且無其它副作用。

藻紅蛋白（R-PE)標記抗體的步驟

1、藻紅蛋白的預(yù)處理

藻紅蛋白凍干粉用純化水溶解，濃度調(diào)整到 5-10 毫克/毫升為宜。

2、藻紅蛋白的衍生化

將琥珀酰亞胺-4-(N-甲基馬來酰亞胺)環(huán)已烷-1-碳酸酯)(SMCC)溶解于無水二甲基亞砜（DMSO）配制成 10毫克/毫升的母液，每毫克的藻紅蛋白添加11微升的琥珀酰亞胺-4-(N-甲基馬來酰亞胺)環(huán)已烷-1- 碳酸酯)(SMCC)，鋁箔封好后于室溫旋轉(zhuǎn)反應(yīng)60分鐘，使藻紅蛋白分子上的氨基與琥珀酰胺反應(yīng)生成衍生化的藻紅蛋白。

交換緩沖液預(yù)先平衡凝膠層析柱，將衍生化的藻紅蛋白過柱，收集藻紅蛋白峰。

3、抗體的處理

二硫蘇糖醇（DTT）溶解于蒸餾水中，配制成1摩爾/升的二硫蘇糖醇（DTT）母液，調(diào)整抗體的濃度，使其濃度至少為4毫克/毫升。

每毫升抗體溶液中加入20微升的二硫蘇糖醇（DTT）母液，室溫靜置反應(yīng)40分鐘，將抗體的二硫鍵打開形成巰基。

交換緩沖液預(yù)先平衡凝膠柱，將反應(yīng)液過柱，收集抗體部分。

4、藻紅蛋白和抗體的共價交聯(lián)

每毫克抗體加入3.2毫克的琥珀酰亞胺-4-(N-甲基馬來酰亞胺)環(huán)已烷-1-碳酸酯)(SMCC)衍生化的藻紅 蛋白，鋁箔封好后于室溫旋轉(zhuǎn)反應(yīng)60分鐘，使藻紅蛋白分子上的馬來酰亞胺基和抗體上的巰基實現(xiàn)共價交聯(lián)。

10毫克的N-乙基馬來酰胺（NEM）溶解于1.0毫升的無水二甲基亞砜（DMSO）中制成N-乙基馬來酰胺（NEM）母液（現(xiàn)配現(xiàn)用）。

每毫克抗體中加入3.4微升N-乙基馬來酰胺（NEM）母液，鋁箔封好后于室溫旋轉(zhuǎn)反應(yīng)60分鐘，反應(yīng)后，使抗體上的巰基封閉。

5、交聯(lián)物的存儲

將交聯(lián)物于存儲緩沖液中透析后保存于2-8℃。